Otázka: Spektrofotometrie
Předmět: Biofyzika
Přidal(a): BobanCreed
Spektrofotometrie
– stanovení koncentrace látek absorbujících nebo vyzařujících viditelné nebo UV záření
– nepřímo i studium struktury
– emisní spektrofotometr
– zdrojem světla je analyzovaná látka
– rozprašuje se do plamene
– přítomna v elektrodách => “hoří“ elektrický oblouk
– hranol nebo mřížka => rozklad světla
– získaný obraz je celé vyzařované spektrum
– v medicíně příliš nevyužívané
– absorpční spektrofotometr
– zdroj světla → kondentor (spojka) → zrdacdlo
– monochromátor
– vstupní štěrbina (vymezení úzkého paprsku) → kolimátorový objektiv
– odrazová optická mřížka (rozklad světla) → objektiv
– výstupní štěrbina
– optická mřížka je posouvatelná => volba vlnové délky
– místo pro vkládání vzorku
– detektor světla – fotoelektrický (fotočlánek, fotonásobič) + zesilovač
– displej
– porovnání s rozpouštědlem => jedno x dvoupaprskové (postupně x zaráz)
– čtečky mikrodestiček
– destička s větším počtem jamek se vzorky
– automatické vyhodnocení
– Lambert-Beerův zákon:
I = I0*10 – εcx
I = intenzita měřeného světla
I0 = původní intenzita světla
x = tloušťka měřené vrstvy
ε = absorpční koeficient (konst.) – ε = f(λ)
c = koncentrace látky
– absorbance:
A= log(I0/I)= εcx
I/I0 = transmitance (vyjádření transparence)
– absorpční křivka
– graf závislosti absorbance na vlnové délce záření = charakteristická pro danou látku
